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本产品是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组DNA污染的反转录系统,5×RTMasterMix为一管式反转录预混 Mix,含有反转录所需的多种试剂(HˉRTase、RNaseInhibitor、dNTP Mixture、Buffer),只需加入模板RNA引物和水即可进行反应。试剂盒采用的反转录酶去除了 RNase H活性,且热稳定性更强,可耐受55℃反应,提高复杂RNA模板的反转录。MasterMix中添加了热敏双链特异性核酸酶,可在反转录过程中直接降解去除RNA样品中残留的基因组DNA(gDNA)污染。Oligo dT & Random Primer单管提供,如需使用特异性引物,可直接将其替换使用。
产品组成：
组分 100T 5×RT MasterMix 400μl 20×Oligo dT & Random Primer 100μl RNase free H2O 2×1ml
使用方法：
1、将模板RNA和试剂在冰上解冻,使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀,简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2、在RNase free管中冰上配制以下反应体系：
组分 体积 Total RNA/mRNA 0.1-2μg 5×RT MasterMix 4μl 20×Oligo dT & Random Primer 或特异性引物 1μl RNase free H2O 补足20μl 3、移液器轻轻吹打混匀,放入 PCR仪运行如下程序
快速程序 标准程序 37℃,15~30min 25℃,10min 85℃,5min 55℃,30~60min 通常可选择快速程序进行反转录反应；如果模板具有复杂二级结构或高GC区域,使用标准程序。
4、得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应,或在-20℃保存,并在半年内使用；长期存放建议分装后在-80℃保存。cDNA应避免反复冻融。
保存方法：避免反复冻融,-20 ℃保存 1年。
注意事项：
1、避免RNase污染。
2、为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3、5×RT MasterMix非常粘稠,易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请点甩离心,
并避免吸头外壁沾附损失。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。