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产品简介
胶原纤维(Collagen Fiber)是结缔组织中分布最广泛含量最多的一种纤维,广泛分布于各种脏器,其中Ⅰ型胶原纤维主要分布于成人皮肤、骨、肌腱等;Ⅱ型胶原纤维主要分布于软骨、椎间盘等;Ⅲ型胶原纤维主要分布于胚胎组织、婴儿皮肤、血管、胃肠道等;Ⅳ型胶原纤维主要分布于基膜中;V型胶原纤维多位于头发、胎盘等处。区分Ⅰ、Ⅲ型胶原最好的染色方法就是天狼猩红染色,天狼猩红是强酸性染料,易与胶原分子中的碱性基团结合,吸附牢固;胶原纤维有正的单轴双折射光的属性,与天狼猩红染料结合后,可增强双折射,提高分辨率,在偏振光显微镜下观察,Ⅰ型胶原较粗大,呈强双折射为黄色或红色,而Ⅲ型胶原较细小,为弱折射,呈绿色。
传统的天狼猩红染液由苦味酸配制,但苦味酸有易燃易爆的风险,吸入、眼睛接触、皮肤接触、吞咽等有毒,危险系数较高。因此,我司推出了安全系数相对较高的改良天狼猩红染液。
本改良天狼猩红染色试剂盒主要由天狼猩红染液A液、天狼猩红染液B液和天狼猩红染液C液组成,不含苦味酸。主要用于各种组织病变时对胶原纤维异常或增生的研究,在偏振光镜下对各种纤维化病变的分型和分级研究也有一定的帮助。
操作步骤
1. 切片准备:石蜡切片:依次将切片放入环保型脱蜡液Ⅰ10min-环保型脱蜡液Ⅱ10min-环保型脱蜡液Ⅲ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-无水乙醇Ⅲ5min-蒸馏水洗。冰冻切片:切片从-20℃冰箱拿出来后,室温复温10min,之后浸入纯水5min后待用。
2. 切片浸泡于天狼猩红染液A液中置于65°烤箱内30min;
3. 切片水洗至组织上黄色褪去即可,稍甩干水,入天狼猩红染液B液浸染2min;
4. 稍水洗,甩干水分,入天狼猩红染液C液浸染30min(骨组织和皮肤若胶原红色浅则延长至1h);
5. 快速水洗1-2s,依次入三缸无水乙醇各3s快速漂洗脱水;
6. 切片入干净的二甲苯透明5min,中性树胶封片。
染色结果
光学显微镜观察结果
胶原纤维
红色
肌纤维及其它成分
黄色
偏振光镜观察结果
Ⅰ型胶原纤维
橙红色或亮黄色
Ⅲ型胶原纤维
绿色
储存与运输
常温避光保存,有效期12个月。
注意事项
1. 使用前应仔细阅读说明书,并在产品使用期限内使用。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套、口罩操作。禁止口鼻吸入,避免皮肤、黏膜直接接触试剂。如果不慎接触到敏感部位,应及时用大量清水冲洗。
3. 脱蜡过程中,如果环境温度太低,担心脱蜡不彻底,可以将第一缸环保型脱蜡液放入65℃烘箱中脱蜡15-30min。
4. 实验过程中,只有天狼猩红染液A液需要65℃处理,其余实验过程都在室温中进行。
5. 天狼猩红染液A液和C液染色过程中需要加盖,避免有效成分挥发,影响染色效果。
6. C液染完后水洗要迅速,水洗时间过长会导致背景黄色褪色。
7. 冰切由于切片厚度的影响,染色时间可缩短至20min。
8. 染好的切片不要烤片,长时间烤片黄色易褪色、背景发灰。染完后的切片建议在1个月内镜检拍照,避免因放置时间太久褪色影响染色结果。
9. 染液可重复使用,一套100ml染液大约可用于150张切片的染色,当着色明显较浅或颜色异常时请更换新的染液。

