产品简介

乙酰胆碱酯酶(Acetyl cholinesterase，AChE)主要存在于神经元的胞质内、神经与肌肉接头处即所谓运动终板处，能水解乙酰胆碱酯。乙酰胆碱是由胆碱能神经释放出的一种神经介质，正常的神经冲动常引起乙酰胆碱过量积累，而乙酰胆碱酯酶则可水解部分乙酰胆碱从而起到生理调节作用。显示乙酰胆碱酯酶的亚铁氰化铜法，操作简便，酶扩散少，方法可靠。

乙酰胆碱酯酶染色(亚铁氰化铜法)的原理是乙酰胆碱酯酶水解碘化乙酰硫代胆碱，释放乙酸和硫代胆碱。硫代胆碱中的硫氢基(-SH)把铁氰化钾还原为亚铁氰化钾，后者与铜离子结合形成不溶性的红棕色至深棕色的亚铁氰化铜沉淀在酶活性部位而显示出来。利用乙酰胆碱酯酶染色可观察该酶在疾病时量的改变，以及显示AChE阳性神经。

配制AChE工作液

（1）取一支5mg AChE碘化底物加入1mL的超纯水震荡混匀，终浓度为5mg/mL。

（2）依次取AChE染色液A液，B液，C液，D液及AChE碘化底物按照1∶2∶2∶13：2的比率进行混合，震荡混匀。

（3）第（2）步混合液经针式滤器过滤（0.45μm 水系滤膜，WG4614）即得到AChE工作液。

注意：每片组织大约需要300μL工作液，根据切片组织数量按用量按顺序配制，现配现用，避免浪费。

使用方法

新鲜组织冰冻切片染色操作步骤（供参考）

1、切片处理：冰冻切片室温复温20min左右之后，纯水浸泡5-10min，去除OCT包埋剂。

2、画圈：用免疫组化笔沿组织周围画圈，减少试剂用量并将组织圈住防止试剂流失。

3、孵育染色液：将切片平放于湿盒中（SIB-20F），在圈内滴加过滤好的AChE工作液完全覆盖组织，水平放置于37℃恒温恒湿箱内避光孵育1~3h，湿盒底部加入少量纯水保持湿润。

4、镜检：倾去染液，镜下观察染色结果，如活性部位阳性棕黄色着色较浅，可蒸馏水清洗后进行第二次孵育，至阳性着色程度合适为止。

5、清洗：蒸馏水洗5min。

6、染核：切片入苏木素染色液染色3min，自来水洗；再经苏木素分化液2s，自来水洗；苏木素返蓝液返蓝15s，自来水冲洗。

7、脱水透明封片：切片依次经70%、80%、95%、100%乙醇脱水，各3min，二甲苯透明5min，中性树胶封片。

储存与运输

4℃避光保存与运输，6个月有效期。

染色结果

AChE酶活性位点着红棕色至深棕色，细胞核着蓝色。

注意事项

1、本染色液适用于新鲜组织冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间。

2、AChE碘化底物使用时需现配现用，若未使用完，可-20℃保存一周内有效。

3、试剂配制时，需要严格按照上述加样顺序进行配制；配制好的AChE染色工作液过滤后应为清绿色，如出现混浊则要重新配。