产品简介

快速蛋白高灵敏度染色试剂盒(Fast Protein Gel Staining Kit)是一种快速简单、可用于SDS-PAGE或非变性 PAGE 等蛋白分离后染色的试剂盒。本试剂盒也可以用于 2D 凝胶的染色，并且染色后兼容后续的质谱检测。本试剂盒只需约 90 分钟内可以完成凝胶的染色。对于 BSA 蛋白，检测灵敏度可以达到0.3ng蛋白。

本试剂盒可足够用于 25 块常规的 8×10cm 凝胶的染色。 说明书后附有实验记录表格，方便记录实验步骤。

使用方法

一、固定步骤

1、漂洗：电泳结束后，凝胶中加入 100ml 双蒸水中漂洗 5 分钟，重复漂洗1 次，去除凝胶表面的电泳缓冲液。

2、固定：取漂洗后的凝胶放入约 100ml 固定液中，在摇床上常温摇动 20 分钟，摇动速度为60-70rpm。固定 40 分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。

固定液的配制：

配制量 100ml

无水乙醇   50ml 

冰醋酸   10ml

超纯水   40ml

3、30%乙醇洗涤：弃固定液，加入 100ml 30%乙醇，在摇床上室温摇动 10 分钟，摇动速度为60-70rpm。30%乙醇的配制： 70ml MilliQ 级纯水或双蒸水中加入 30ml 乙醇，混匀后即成 100ml 30%乙醇。

4、水漂洗：弃 30%乙醇，加入 100 ml MilliQ 级纯水或双蒸水，在摇床上常温摇动5 分钟，摇动速度为 60-70 rpm；重复漂洗一次。

二、增敏步骤

1、弃水，加入 100ml 增敏液(1×)，在摇床上室温摇动 2 分钟，摇动速度为60-70rpm。

增敏液(1×)的配制：

99 ml MilliQ 级纯水或双蒸水中加入 1ml 增敏液(100×)，混匀后即为增敏液(1×)。增敏液(1×)配制后需在 2 小时内使用。

2、水漂洗(共 2 次)：弃原有溶液，加入 200ml MilliQ 级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1 分钟，摇动速度为 60-70rpm。重复此步骤一次。

三、染色步骤

1、弃水，加入 100ml 染色溶液(1×)，在摇床上室温摇动 10 分钟，摇动速度为60-70rpm。染色过程中，凝胶会呈微微黄色。 染色溶液(1×)的配制： 99ml MilliQ 级纯水或双蒸水中加入 1ml 染色溶液(100×)，混匀后即为染色溶液(1×)。染色溶液(1×)配制后需在 2 小时内使用。

2、水洗涤：弃原有溶液，加入 100ml MilliQ 级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1-1.5 分钟，摇动速度为 60-70rpm。

注意：水洗涤的时间不能超过 1.5 分钟。

四、显色步骤

弃水，加入 100ml 显色液，在摇床上室温摇动 3-7 分钟，直至出现比较理想的预期蛋白条带，摇动速度为 60-70rpm。

显色液的配制：

配制量 100 ml

基本显色液(10×)    10ml

超纯水    90ml

显色加速液(2000×) 50μl

注：显色加速液(2000×)有刺激性气味，建议在通风橱内操作；显色液配制后需在 20 分钟内使用。

五、终止步骤

1、漂洗：弃显色液，加入 100ml 双蒸水在摇床上常温摇动 2 分钟，漂洗掉凝胶上残留的显色液。

2、终止染色：弃显色液，加入 100ml 终止液(1×)，在摇床上常温摇动 10 分钟，摇动速度为60-70rpm。终止时有气体产生属正常现象，产生的气体为二氧化碳。 终止液(1×)的配制： 95ml MilliQ 级纯水或双蒸水中加入 5ml 终止液(20×)，混匀后即为终止液(1×)。终止液(1×)配制后应当天使用。

3、水洗涤：弃终止液，加入 100ml MilliQ 级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动5 分钟，摇动速度为60-70rpm。

六、保存

可在 MilliQ 级纯水或双蒸水中保存，或采用适当的方式制备成干胶。

保存条件

常温保存，开封后一年有效。

注意事项

1、由于该方法染色非常灵敏，操作时请注意尽量使用高纯度的水，并确保所使用的器皿非常清洁，最好使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套，避免皮肤和凝胶直接接触。

2、需自备乙醇、冰醋酸及 MilliQ 级纯水或双蒸水。

3、上述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为 8×10cm 厚度为 0.75-1mm 的凝胶。对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间需按照厚度的比例适当延长10-20 分钟。

4、本说明书所指的常温温为 20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各步骤需适当延长时间。

5、基本显色液(10×)在低温环境下可能会出现沉淀，可在 37℃水浴中溶解，并充分混匀后使用。

6、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题

1、背景太深

（1）显色时间过长。通常显色反应会在 10 分钟内结束，显色反应时间过长会导致背景很深。

（2）洗涤不充分。洗涤时间过短，或洗涤液加入的量不足，或者容器过于狭小导致摇动时溶液不易充分混合，或摇动速度过慢，导致混匀不充分。请按照说明书的建议确保各种溶液的用量和作用时间，摇床的推荐速度为 60-70rpm。

（3）凝胶中原有的缓冲液等未在固定步骤中去除干净。一方面需确保固定的时间和固定液的用量，另一方面对于不是最常用的 Bis-Tris 系统的凝胶需要更长的固定时间以充分去除凝胶中的原有缓冲成分，以降低背景。

（4）水的纯度太低。需使用大于 16 MΩ·cm 的高纯度水。

2、蛋白条带非常浅

（1）蛋白的半胱氨酸(Cysteine)残基的含量特别低或几乎没有。半胱氨酸残基的存在对于染色非常重要，半胱氨酸残基的含量过低会导致检测灵敏度下降。

（2）染色后水洗涤时间过长。在染色溶液染色时需严格控制水洗涤的时间，水洗涤的时间不能超过1.5 分钟，否则会导致过多的显色离子被洗去，导致检测灵敏度下降。

（3）上样量不足。本试剂盒检测 BSA 的灵敏度可以达到 0.3ng，对于不同的蛋白检测灵敏度可能不同。对于一些蛋白可能需要大于 1ng 的蛋白量才能被检测到。

（4）固定步骤后的洗涤不够充分。导致少量乙酸残留，影响后续检测。确保30%乙醇洗涤和水洗涤的用量和时间，可以适当延长洗涤时间。

3、凝胶上出现小点或其它非蛋白的痕迹

（1）凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器，并加入足量的各种溶液，同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。

（2）用于染色的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤，随后用自来水充分冲洗，最后用高纯度水再洗涤数次。该容器最好能专用于染色，并注意避免各种可能的蛋白污染。

（3）指纹或其它压痕。请注意戴手套操作，切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。

（4）有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。

4、在 60-70 kD 处出现一片模糊的蛋白染色背景

皮肤上脱落的角蛋白(keratin)污染了蛋白样品。一方面需注意戴手套操作，另一方面需注意盛放蛋白样品的容器盖子尽量不要敞开，甚至在取放蛋白样品时在超净台内进行以避免可能的角蛋白污染。

5、在凝胶的顶端处出现黄色背景

（1）样品使用了含有 DTT 的上样缓冲液。换用含有其它还原试剂如β-巯基乙醇的上样缓冲液。

（2）采用 Tris-Glycine-SDS 电泳体系。Tris-Glycine-SDS 电泳体系中的Glycine 会导致背景凝胶的顶端出现轻微的黄色背景。