产品中心
- 产品简介
- 使用说明
- 相关产品
- 参考文献
- 购买咨询
产品简介
DNA退火缓冲液即DNA寡核苷酸退火缓冲液,是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液,可用于常规的DNA oligo的退火,尤其适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。该缓冲液能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接,转化后可以得到大量的阳性克隆。
本试剂操作简单,只需把待退火的DNA oligo和退火缓冲液按照一定比例混合后,置于PCR仪上进行程序降温,约90min即可完成。
使用方法(仅供参考)
1. 把待退火的DNA oligo用无酶水配制成50uM,同时彻底溶解退火缓冲液(5×)备用。
2. 按如下反应体系操作
步骤
组份
体积
1
无酶水
40μl
2
退火缓冲液(5×)
20μl
3
DNA oligo A (50μM)
20μl
4
DNA oligo B (50μM)
20μl
Total
100μl
按照上述步骤,依次加入对应溶液并混匀,如果使用的PCR仪没有热盖设定,可加入Mineral Oil(矿物油)防止在后续反应中液体挥发,一般5-10ul即可。
3. 按如下设定PCR程序,进行退火:
步骤
温度
时间
作用
1
95℃
2min
Oligo充分变性
2
每90s下降1℃,降至25℃
约90min
程序退火
3
4℃
-
保存
注:如果使用的PCR仪无法设定梯度降温功能,也可以选择在经过95℃,2min后,把管子拿出,自然冷却至室温。
4. 反应结束后产物可以直接用于后续实验,如需保存请放于-20℃。
保存条件
-20℃保存,有效期1年。
注意事项
1、 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
2、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

