产品简介

腐草霉素（Phleomycin）是以Phleomycin D1为主的结构类似的糖肽类抗生素混合物，是从轮状链霉菌(Streptomyces verticillus)的一个突变体菌株中分离而来。它对细菌、真菌(包括酵母)、植物和哺乳动物细胞均有抑制作用和细胞毒性。它对细菌、真菌、植物和哺乳动物细胞均有抑制作用和细胞毒性，常用于筛选表达Zeocin抗性基因的多克隆或单克隆细胞，或用于相应的多克隆或单克隆细胞的维持性培养。大肠杆菌筛选推荐浓度为5μg/ml（低盐LB培养基，NaCl浓度不能超过5g/L），酵母筛选推荐浓度为10μg/ml，哺乳动物细胞筛选推荐浓度为5~50μg/ml。

本产品有效成分和Zeocin基本一致，都为Phleomycin D1，抗性基因也都为Sh ble。两者的配方有一定的区别，Zeocin是以Phleomycin D1为主要成分的一种配方，添加了不同的辅料，更适用于哺乳动物细胞的筛选；而Phleomycin是结构相似抗生素的混合物，它们的末端氨基有一定的区别，建议用于对Zeocin不敏感的细胞，如丝状真菌和一些酵母等。

本产品配制在HEPES溶液中，浓度为20mg/ml，经滤膜过滤除菌，可以直接用于细胞培养。

使用方法（仅供参考）

本产品通常以5-50 μg/ml的浓度使用。然而，影响筛选浓度的主要因素包括离子强度、细胞类型、细胞生长密度以及生长速率等。根据细胞类型的不同，需要1-2周可以筛选到Phleomycin抗性的细胞，最佳工作浓度需要通过剂量效应曲线来确定。

一、最佳工作浓度的确定

接种细胞使得细胞密度约为25%，按照16或24个细胞培养孔（分别为复孔或三复孔）准备培养的细胞，培养24h。

去除细胞培养液，换成含不同浓度Phleomycin的新鲜筛选培养液（0, 5, 10, 20, 30, 40, 50和100μg/ml）。

每2-4天更换新鲜的筛选培养液，观察存活细胞的比例，选择在1-2周内杀死所有细胞的最低浓度作为最佳工作浓度。

二、稳定细胞株的筛选

按照20%-30%的细胞密度接种细胞，培养过夜。

转染携带Phleomycin抗性基因的质粒或感染携带Phleomycin抗性基因的病毒，同时设置没有转染质粒或感染病毒的细胞作为对照。

转染或感染48-72h后，换成含有最佳工作浓度的Phleomycin的新鲜培养液，继续培养。如果有必要，可以对细胞进行传代，略稀释后进行筛选培养。

每2-4天更换含有Phleomycin的新鲜筛选培养液。

对照组正常细胞100%死亡，Phleomycin抗性组中存活的细胞即为表达Phleomycin抗性基因的细胞。然后根据实验目的进行多克隆或单克隆细胞的筛选。

三、稳定细胞株的维持（可选取以下方式之一）

1、使用含有与上述筛选稳定转染细胞株相同浓度的Phleomycin筛选培养液来维持培养。

2、降低Phleomycin浓度为筛选浓度的一半进行维持培养。

3、使用刚好能预防敏感细胞生长但不足以致死的Phleomycin浓度来维持培养。

保存条件

-20ºC避光保存，至少一年有效。避免反复冻融。

注意事项

1、本产品人体有害，操作时请小心，并注意有效。

2、本产品在过高或过低pH及弱氧化剂的条件下不稳定，且变性不可逆。在培养细菌时，需适当降低细菌培养基的盐浓度(低盐LB培养基，NaCl浓度不能超过5g/L)并调整pH至5，从而使其保持活性。

3、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。